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Elisa試劑盒操作方法及注意事項講解

發布時間:2021-10-15      點擊次數:76
  Elisa試劑盒的操作方法:
 
  1.包被抗體:用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度(1~10μg/ml),每凹孔加0.3ml,4℃過夜,或37℃水浴3小時,貯存冰箱。
 
  2.洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。
 
  3.分2組,a組加酶標記抗原和被檢抗原Elisa試劑盒混合液0.2ml,b組只加酶標記抗原液0.2ml,37℃作用1~2小時。(混合液可作成不同稀釋度)
 
  4.洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。
 
  5.加入0.2 ml底物溶液于每個凹孔(OPD或OT),室溫作用30分鐘(另作一空白對照,0.4ml底物加0.1ml終止劑)。
 
  6.加終止劑:每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。
 
  7.用酶標比色計測定a、b兩組OD值,并求出a、b、OD值的差數。
 
  Elisa試劑盒的注意事項:
 
  1.干冰是固體二氧化碳,溫度為零下78℃,濕冰就是冰的溫度,一般為冷凍條件的溫度,如在零下20℃冷凍的冰的溫度為零下20℃。對于一些酶類等蛋白產品,需要干冰運輸,其他大多數生化試劑采用濕冰即可;
 
  2.運輸常溫試劑的時候,不需要冰。對于需要冷藏的試劑,在用冰運輸的時候,要把試劑同冰之間有隔離物,不能直接接觸試劑包裝,如試劑外面加裝盒子,在盒子外面加冰,基本都采用冰塊,不能直接用水結成的冰,因為冰融化后會形成水,容易污染試劑。加冰塊的量沒有嚴格限制,以試劑Elisa試劑盒四周都處于冰塊包圍為宜;
 
  3.不要小看生物試劑的量,很多抗體類試劑、酶類試劑是很貴的,可以達到上千元/mg(即每公斤幾百,上千萬元),其保存條件也是很嚴格的,否則容易失去活性。運輸的時候建議使用冰塊,而非碎冰,
 
  主要原因:(1)碎冰的溫度高,而冰塊的溫度更低;
 
  (2)冰塊可以更長時間的保持低溫;
 
  (3)碎冰容易化成水。
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